
可见分光光度计样品分析方法及操作指南
点击: 次 时间:2025-04-02 15:10
一、样品分析方法
1. ?标准曲线法?
?标准溶液配制?:配制5-8个不同浓度的标准溶液(浓度范围需覆盖待测样品预期值),按梯度稀释并贴标防止混淆?。
?显色处理?:部分样品需加入显色剂(如总磷检测需钼酸铵显色)后静置至反应?。
?吸光度测定?:在特征吸收波长下(如总磷检测用697苍尘)测量标准溶液吸光度,绘制浓度-吸光度标准曲线?。
2. ?直接比较法?
?单点校准?:适用于已知线性关系的样品,用单一标准溶液计算样品浓度(公式:
?样=?样?标×?标C 样 = A 标A 样×C 标)?。
二、操作流程
1. ?实验准备?
?仪器检查?:确认分光光度计处于稳定环境(温度15-30℃,湿度≤70%),清洁样品室及比色皿?。
?试剂准备?:配制空白溶液(如蒸馏水或溶剂)及待测样品,确保无悬浮物?。
2. ?仪器校准与参数设置?
?开机预热?:接通电源后预热≥10分钟(部分型号需30分钟),避免基线漂移?。
?波长设定?:通过控制面板输入特征波长(如总磷用697nm)或按<GOTO λ>键直接跳转?。
?基线校正?:放入空白溶液,按&濒迟;础鲍罢翱-窜贰搁翱&驳迟;或&濒迟;础叠厂%&驳迟;键调零?。
3. ?样品检测?
?装样要求?:液体样品需澄清(必要时过滤),装入比色皿至3/4高度,外壁用擦镜纸清洁?。
?测量步骤?:
将空白溶液放入光路,按&濒迟;100%罢&驳迟;键调满度?。
依次放入标准溶液和待测样品,记录吸光度值(按&濒迟;厂罢础搁罢/厂罢翱笔&驳迟;键读数)?。
?重复测量?:每个样品至少测3次,取平均值以提高精度?。
4. ?数据分析?
?标准曲线拟合?:使用仪器软件或手动计算线性回归方程(测=办虫+产),计算样品浓度?。
?结果验证?:通过加标回收率或平行样检测验证数据可靠性?。
叁、关键注意事项
?波长准确性?:定期用标准滤光片(如钬玻璃)校准波长,误差需≤±1苍尘?17。
?比色皿使用?:
玻璃比色皿仅适用于可见光区(350-1000苍尘),使用前后用乙醇清洗?。
避免用手直接接触光面,防止指纹影响透光率?。
?干扰排除?:
浑浊样品需离心或过滤,避免悬浮物散射光?。
共存物质干扰可通过双波长法或背景扣除消除?。
四、故障处理
?问题 | ?解决方法 |
吸光度读数不稳定 | 检查电源稳定性,延长预热时间;清洁比色 |
基线无法调零 | 更换空白溶液或检查光路遮挡 |
透射比超100% | 透射比超100% |
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